L'elettroforesi è una tecnica di laboratorio eseguita con l'obiettivo di separare le molecole in base alla loro dimensione e carica elettrica in modo da poter fare diagnosi di malattie, verificare l'espressione delle proteine o identificare i microrganismi.
L'elettroforesi è una procedura semplice ed a basso costo, utilizzata nelle routine di laboratorio e nei progetti di ricerca. A seconda dello scopo dell'elettroforesi, potrebbe essere necessario eseguire altri test ed esami per arrivare ad una diagnosi, ad esempio.
Cosa serve
L'elettroforesi può essere eseguita per diversi scopi, sia nei progetti di ricerca che nella diagnosi, poiché è una tecnica semplice ed a basso costo. Pertanto, l'elettroforesi può essere eseguita per:
- Identificare virus, funghi, batteri e parassiti, con questa applicazione più comune nei progetti di ricerca;
- Test di paternità;
- Controlla l'espressione delle proteine;
- Identificare le mutazioni, essendo utile nella diagnosi delle leucemie, per esempio;
- Analizzare i tipi di emoglobina circolante, utili nella diagnosi dell'anemia falciforme;
- Valuta la quantità di proteine presenti nel sangue.
Secondo lo scopo dell'elettroforesi, potrebbe essere necessario eseguire altri test complementari affinché il medico completi la diagnosi.
Come si fa
Per eseguire l'elettroforesi è necessario il gel, che può essere poliacrilammide o agarosio a seconda dell'obiettivo, tampone e vasca per elettroforesi, marker di peso molecolare e un colorante fluorescente, oltre a un'apparecchiatura di luce UV o LED, nota anche come transilluminatore.
Dopo aver preparato il gel, è necessario posizionare un oggetto specifico per creare i pozzetti nel gel, comunemente chiamato pettine, e lasciare che il gel si solidifichi. Quando il gel è pronto, basta applicare le sostanze nei pozzetti. Per questo è necessario posizionare in uno dei pozzetti un marker di peso molecolare, un controllo positivo, che è la sostanza che si sa cos'è, un controllo negativo, che garantisce la validità della reazione, e dei campioni da analizzare. Tutti i campioni devono essere miscelati con un colorante fluorescente, in quanto in questo modo è possibile visualizzare le bande sul transilluminatore.
Il gel con i campioni deve essere posto nella vasca per elettroforesi, che contiene la specifica soluzione tampone, e quindi il dispositivo viene acceso in modo che ci sia corrente elettrica e, di conseguenza, differenza di potenziale, che è importante per la separazione delle particelle secondo al loro carico e alle loro dimensioni. Il tempo di esecuzione elettroforetico varia a seconda dello scopo della procedura e può durare fino a 1 ora.
Dopo il tempo determinato, è possibile visualizzare il risultato della corsa elettroforetica attraverso il transilluminatore. Quando il gel viene posto sotto la luce UV o LED, è possibile visualizzare il pattern delle bande: più grande è la molecola, meno migra avvicinandosi al pozzo, mentre più leggera è la molecola, maggiore è il potenziale migratorio.
Affinché la reazione sia validata, è necessario che siano visualizzate le bande del controllo positivo e che nel controllo negativo non venga visualizzato nulla, altrimenti è indicativo che c'è stata contaminazione, e tutto il processo deve essere ripetuto.
Tipi di elettroforesi
L'elettroforesi può essere eseguita per diversi scopi e, a seconda del suo scopo, possono essere utilizzati diversi tipi di gel, i più comuni sono poliacrilammide e agarosio.
L'elettroforesi per identificare i microrganismi è più comune da eseguire nei laboratori di ricerca, tuttavia, per scopi diagnostici, l'elettroforesi può essere utilizzata per identificare malattie ematologiche e malattie che evolvono con l'aumento della quantità di proteine, essendo i principali tipi di elettroforesi:
1. Elettroforesi dell'emoglobina
L'elettroforesi dell'emoglobina è una tecnica di laboratorio eseguita per identificare i diversi tipi di emoglobina circolanti nel sangue, consentendo di identificare la presenza di malattie legate alla sintesi dell'emoglobina. Il tipo di emoglobina viene identificato mediante elettroforesi ad un pH specifico, idealmente compreso tra 8,0 e 9,0, verificando un pattern di bande confrontabile con il pattern normale, consentendo l'identificazione della presenza di emoglobine anomale.
A cosa serve: l'elettroforesi dell'emoglobina viene eseguita per indagare e diagnosticare malattie legate alla sintesi dell'emoglobina, come l'anemia falciforme e la malattia da emoglobina C, oltre ad essere utile nella differenziazione della talassemia. Impara a interpretare l'elettroforesi dell'emoglobina.
2. Elettroforesi delle proteine
L'elettroforesi delle proteine è un esame richiesto dal medico per valutare la quantità di proteine circolanti nel sangue e, quindi, per identificare le malattie. Questo test viene eseguito da un campione di sangue, che viene centrifugato per ottenere il plasma, la parte di sangue costituita, tra le altre sostanze, dalle proteine.
Dopo l'elettroforesi è possibile visualizzare un pattern di bande e, successivamente, un grafico in cui è indicata la quantità di ciascuna frazione di proteine, fondamentale per la diagnosi.
A cosa serve: l'elettroforesi delle proteine consente al medico di indagare sull'insorgenza di mieloma multiplo, disidratazione, cirrosi, infiammazione, malattie del fegato, pancreatite, lupus e ipertensione secondo lo schema delle bande e il grafico presentato nel rapporto dell'esame.
Comprendi come si fa e come capire il risultato dell'elettroforesi delle proteine.
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Bibliografia
- ENCICLOPEDIA BIOSFERA, CENTRO SCIENTIFICO DELLA CONOSCENZA. Elettroforesi: concetti e applicazioni. 2015. Disponibile su :. Accesso il 24 settembre 2019
- KASVI. Cos'è l'elettroforesi e perché è importante?. Disponibile in: . Accesso il 24 settembre 2019
